徠卡熒光顯微鏡的性能特點
徠卡顯微鏡是任何顯微術(shù)的基本工具,它的主要作用是使被檢標本圖象得到不同程度的放大。在徠卡熒光顯微術(shù)中,徠卡熒光光源裝置是提供一定波長的激發(fā)光使被檢標本受激發(fā)射熒光,再通過徠卡顯微鏡的物鏡,目鏡系統(tǒng)使熒光圖象放大以供觀察,因此,一般來說,任何顯微鏡都可以用于熒光顯微術(shù)。不過,由于徠卡熒光顯微鏡所放大的象是熒光圖象,必須根據(jù)熒光產(chǎn)生和表現(xiàn)的特點,因此在使用方法上略有講究。
一般顯微鏡的光學元件,大都采用普通光學玻璃制造。它們對3000A以上的長波紫外線和可見光能很好地透過,因此完滿足一般徠卡熒光顯微術(shù)的要求,只是在個別情況下,當標本必須用短波紫外線激發(fā)時,才需用石英玻璃或特種玻璃的聚光鏡和反射鏡,這時載玻片也必須是特制的,但在透射光顯微術(shù)時,物鏡和目鏡只需用普通光學玻璃即可。如在反射光顯微術(shù)時,則物鏡必須能透過紫外光的?,F(xiàn)就徠卡熒光顯微術(shù)的特點,介紹一下徠卡熒光顯微境的性能特點。
(1)徠卡反光鏡其反光層以鍍鋁為好,因為鋁對紫外光和可見光的紫藍區(qū)吸收少,反射率達90%以上,而鍍銀的反射率只達70%,另外應(yīng)采用外反射,以避免光線來回經(jīng)過玻璃而引起損失。同時要使用平面反光鏡而不使用凹面反光鏡,這樣使光源射來的光線基本平行。
(2)徠卡聚光器有三種;明場聚光器、暗場聚光器和相襯熒光聚光器。
①明場聚光器假如標本可用較長的光波來激發(fā)成熒光,則可用徠卡阿貝聚光鏡,而微弱的熒光或須用短波紫外光作光源的話,則必須用石英玻璃和熒石玻璃等材料制作的聚光鏡,否則,紫外光將會全部被普通玻璃所吸收。另外,由于徠卡油浸鏡頭的香柏油會自發(fā)熒光,會擾亂觀察,所以不宜使用,必須使用不發(fā)熒光的化學純甘油或檀香油等。
②徠卡暗場聚光器由于使用暗場聚光器時,激發(fā)光不直接進入物鏡,而不致直接射入眼中,這樣激發(fā)濾片可以大大減薄,從而顯著地增大了激發(fā)光的強度,抑制濾片也可以很薄,甚至可以不用。
由于徠卡暗場熒光顯微術(shù)時,它的背景是黑的,固增強了熒光圖象的亮度和反襯度,這樣,不僅提高了圖象的質(zhì)量、觀察舒適,而且還能觀察出明場觀察時分辨不出來的細微顆粒,因此具有超顯微術(shù)的意義。
(3)徠卡相稱熒光聚光鏡它與普通聚光器相同,只是它的透鏡能透過紫外光,如與相襯物鏡配合使用,則可作相襯顯微術(shù),也可作熒光顯微術(shù),在同時有兩個光源(一個是汞燈作為熒光激發(fā)光,一個是白熾燈作為相襯照明)或者是一個光源通過適當安排分成兩條光路。在這樣的情況下,則可同時進行相襯,熒光聯(lián)合觀察,既能看到熒光圖象,又能看到相襯圖形,在某些情況下,有助于目標的定位和結(jié)果的正確判斷。