徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術(shù)的特點
熒光顯微術(shù)是普通顯微術(shù)的重大發(fā)展。它具有*的*性。熒光顯微術(shù)是在黑暗的背景下觀察標(biāo)本的彩色圖像，有良好的反襯，故觀察清楚、方便，易于鑒別，眼睛也不易疲勞。由于熒光染色素的濃度極?。▋x1：100000）便能發(fā)出明亮的熒光，因此一般油機(jī)體眾說是無毒的，為活體觀察，如研究功能器官的過程和細(xì)微結(jié)構(gòu)，某些代謝過程的變化等，提供了廣泛的可能性。另外，熒光色素染色法比較簡單，時間短，標(biāo)本制作容易，特別適于快速工作，如傳染病的快速診斷等。
（1）熒光顯微術(shù)方法的選擇徠卡熒光顯微鏡可用明場或暗場方法，—般用暗場效果較好，因為它產(chǎn)生的現(xiàn)場背景是黑的，圖象反襯強(qiáng)，不過沒有明場方便。至于透射熒光還是反射熒光，一般來說，反射熒光應(yīng)用范圍廣一些，它不僅適用觀察普通標(biāo)本片，而且還能現(xiàn)察不適明標(biāo)本。
根據(jù)激發(fā)光波長的特點，熒光顯微術(shù)可用紫外光或紫藍(lán)光激發(fā)。紫外光的特點在可觀察機(jī)體組織的自體熒光（如核酸及金剛石等）在組織學(xué)工作中便于區(qū)別背景熒光和染色目標(biāo)的熒光。但缺點是：常常會引起標(biāo)本熒光的光致淬滅，標(biāo)本難以重復(fù)觀察，并且使徠卡顯微攝影發(fā)生團(tuán)難。另外對活體標(biāo)本有叨顯的殺傷作用，對長期從事這項工作人員的暇睛也有傷害。特別是對絕大多數(shù)的熒光色素來說，紫外區(qū)不是zui大的光譜吸收風(fēng)因而不能得到先分的激發(fā)。而紫藍(lán)光卻沒有以上—些缺點，但不足的是不能激發(fā)組織的自體熒光，因此不適于研究組織的白體熒光結(jié)構(gòu)。對于個別熒光色素，知羅達(dá)明R200，可用波長更長的藍(lán)綠光作為激發(fā)光為佳。
（2）結(jié)果記錄方法徠卡熒光顯微術(shù)所觀察的熒光圖象，主要以兩個指標(biāo)判斷結(jié)果，一是形態(tài)學(xué)特征，二是熒光的亮度。在免疫熒光工作中，尤其是這樣，必須將兩者結(jié)合起來綜合判斷，不可偏廢。結(jié)果記錄是根據(jù)主觀指標(biāo)或客觀指標(biāo)，但一般常是憑工作者目力觀察的主觀指標(biāo)由于這是定性的觀察，所以記錄的度較差。
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，采用客觀指標(biāo)記錄結(jié)果已開始應(yīng)用。
①用不同厚度的中性濾片插入激發(fā)濾片和標(biāo)本之間的光路中，以看熒光減弱的極度；
②不同標(biāo)本以相同的曝光時間進(jìn)行顯微攝影，然后用光密度計測定膠卷圖象；
③直接用熒光計測熒光色素和兔疫熒光染色的鏡下標(biāo)本；
④用光敏電池曝光表測定圖象的亮度，或者與掃描裝置結(jié)合，對視場的特定部位進(jìn)行掃描等，如徠卡熒光顯微光度計。
